DH10Bac感受态细胞

产品货号：

SN0077

中文名称：

DH10Bac感受态细胞

英文名称：

CheCom DH10Bac Chemically Competent Cell

产品规格：

100μL×10

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

DH10Bac感受态细胞经优化的感受态制备工艺制作而成。DH10Bac感受态细胞用于生产真核蛋白表达用的重组杆状病毒分子(Bac-to-Bac杆状病毒表达系统)。DH10Bac细胞含有父代杆状病毒穿梭载体Bacmid（bMON14272）和辅助质粒（pMON7142），前者含有低拷贝mini-F复制子、卡那抗性基因、attTn7位点和lacZα互补因子，后者含有tnsABCD区（表达转座所必须的转座蛋白）和四环素抗性。供体质粒pFastBac（具有庆大霉素抗性）上mini-Tn7位点和bMON14272上mini-attTn7之间发生转座，可产生重组Bacmid，经筛选提取后可用于昆虫细胞转染和之后的外源重组蛋白表达。mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10Bac菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

基本信息：

基因型	F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124
转化效率	使用pUC19质粒DNA检测，转化效率＞10⁸ cfu/μg。

适用范围：

DH10Bac感受态细胞适用于生产真核蛋白表达用的重组杆状病毒分子(Bac-to-Bac杆状病毒表达系统)、蓝白斑筛选等实验。

产品组成：

组分	规格
DH10Bac感受态细胞	100μL×10
pUC19对照质粒(10ng/μL)	10μL

保存：-80℃，有效期6个月。

注意事项：

本制品具有卡那和四环素抗性。
请勿将感受态反复冻融。
感受态细胞应插入冰上缓慢融化（请勿用手握化）后立即加入目的DNA，此时转化效率最高。
感受态细胞融化后长时间置于冰上不加目的DNA会降低转化效率。
加入目的DNA时应轻柔操作。
目的DNA不能超过感受态总体积的1/10。

使用方法：

取100μL冰上融化的感受态细胞，加入供体质粒（pFastBac等），轻柔混匀，冰上静置30min。
42℃水浴热激45 s，迅速冰上静置2min。
注意不要晃动离心管，以免降低转化效率。
向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基（2×YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏1h。
根据实验需求吸取不同体积的感受态细胞加到含有相应抗生素的2×YT或LB固体培养基上，均匀涂开后吹干平板。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

常见问题：

转化后平板不长菌或长菌数较少？
- 建议检查上游质粒质量、反应温度及时间是否合适；
- 感受态细胞失效或效率降低。使用新鲜感受态细胞，感受态请勿反复冻融，建议使用本制品中附带pUC19质粒做一组阳性对照实验；
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，抗生素种类、用量是否正确，建议重新配制平板重复实验。
转化后平板出现卫星菌落或杂菌？
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，用量是否正确；
- 培养温度或时间不合适。检查培养箱温度，37℃培养时间不宜过长；
- 存在污染。感受态细胞在操作过程中被污染，建议做一组阴性对照实验（不加DNA只转化空感受态于抗性平板）检查操作过程是否污染了相同抗性的菌株。若存在污染，建议更换试剂及耗材，可使用核酸清洁剂对实验台面、环境进行清洁。

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